关于柱层析的一些经验分享

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往期分享了一些实验室的小技巧,最近又总结了一些,如果大家有什么小技巧可以私信我,分享给更多的人,谢谢。

1:过正相柱的小技巧

情景一:化合物极性小,TLC板极性介于石油醚或石油醚比乙酸乙酯10:1之间。建议干法上样,如果粗产物在石油醚里溶的很好,建议拌样溶剂选择石油醚;如果石油醚溶的不好,建议用二氯甲烷。切记不要用乙酸乙酯等大极性溶剂,硅胶具有一定的吸附能力,即使干法拌的样很干,里面还会残留一些大极性的溶剂(如乙酸乙酯等),这样就会造成部分产物和杂质一起下来,损失一些产物。如果换成石油醚或二氯甲烷就会好一些,石油醚就不说了,二氯甲烷极性介于石油醚比乙酸乙酯(3:1 to 5:1)之间,且二氯甲烷极易挥发,拌样的时候也很容易从体系内挥发出去。

情景二:产物溶解度差,TLC极性在石油醚比乙酸乙酯(5:1 to EA)。如果采用干法上样,仍用石油醚和乙酸乙酯体系过柱子,会发现有可能比产物极性大的杂质也和产物一起下来了,或者从某个点产物和杂质一起出来了,到最后产物还在出。原因分析:杂质在这个极性区间的溶解度比产物好,产物溶解度差并不代表不溶解,只是慢慢溶而已,而溶解度差的杂质也是一样的道理。对于这种情况建议用湿法上样,如果还不能解决,那就换柱层析体系,用溶解度好的二氯甲烷和某溶剂的体系。

2过反相柱的小技巧

 

情景一反相柱可以湿法上样么?答案是可以的。反相柱体系:乙腈-水,甲醇-水等。我比较建议用乙腈-水体系,因为它和lcms体系更贴合。如果我们手里有反向硅胶,完全可以用干法上样,操作和正相拌样一样。简单介绍一下过反相柱的经验。一:新买的反相柱怎么开柱?开柱好不好直接影响柱子的分离度和使用寿命。法,柱子先用5%的乙腈水溶液润洗一下,再用5%95%(乙腈含量)空走一次,然后再用5%的乙腈体系平衡一下,向柱子中打入些许甲苯,用5%-95%(乙腈含量)走一次,如果峰形很漂亮,说明开柱成功,可以正常使用(一般都成功),接下来按着常规操作就可以了。情景二:柱子黑了,堵了,怎么办?几千块钱买的柱子没用几次,很黑,流速又慢,有钱的公司可能直接垃圾桶了。不一定的拯救方法:反向冲柱,可以水相加酸,可以用大极性溶剂,如:甲醇,DMF等,拯救回来的柱子分离度没问题,但是一定要注意保养。反向上样溶剂一定要水溶性的,如甲醇、乙醇、DMFDMSO等;一定要过滤。滤头不值钱。DMSO可能不好过滤或者柱压过高,建议其它溶剂,三:反相柱上样溶剂量,肯定是越少越好,推荐溶解度好的DMFDMSO,和上面讲的没矛盾。原理参照正相柱原理,四:出产物比例怎么换算?假如:3分钟的lcms体系(5%-95%)产物正好在乙腈50%出峰了。可以参照(95%-5%)x50%的比例,也就是产物在乙腈45%的时候出峰了,我们过柱子的时候可以减少5%10%的乙腈浓度。毕竟反相柱和lcms是有区别的。

情景二:过完反相柱一般要后处理了。无外乎三种操作:1:直接浓缩干,底物要稳定;2:萃取,直接用溶剂萃取提取;3:冻干,一定要先把乙腈旋一下,如果底物不稳定就算了。冻干技巧,如果不需要快,一般操作就可以。如果想快,冰层越薄越好,可以用吹风机稍微吹一下,温度控制在40度以内,手摸着温温就最大极限了。冻干的表现:1摸瓶壁不再感觉到凉;2晃动瓶子,内部小颗粒不再释放气体;以上这些并不绝对。


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