关于柱层析的一些经验分享

往期分享了一些实验室的小技巧，最近又总结了一些，如果大家有什么小技巧可以私信我，分享给更多的人，谢谢。

1：过正相柱的小技巧

情景一：化合物极性小，TLC板极性介于石油醚或石油醚比乙酸乙酯10:1之间。建议干法上样，如果粗产物在石油醚里溶的很好，建议拌样溶剂选择石油醚；如果石油醚溶的不好，建议用二氯甲烷。切记不要用乙酸乙酯等大极性溶剂，硅胶具有一定的吸附能力，即使干法拌的样很干，里面还会残留一些大极性的溶剂(如乙酸乙酯等)，这样就会造成部分产物和杂质一起下来，损失一些产物。如果换成石油醚或二氯甲烷就会好一些，石油醚就不说了，二氯甲烷极性介于石油醚比乙酸乙酯(3:1 to 5:1)之间，且二氯甲烷极易挥发，拌样的时候也很容易从体系内挥发出去。

情景二：产物溶解度差，TLC极性在石油醚比乙酸乙酯(5:1 to EA)。如果采用干法上样，仍用石油醚和乙酸乙酯体系过柱子，会发现有可能比产物极性大的杂质也和产物一起下来了，或者从某个点产物和杂质一起出来了，到最后产物还在出。原因分析：杂质在这个极性区间的溶解度比产物好，产物溶解度差并不代表不溶解，只是慢慢溶而已，而溶解度差的杂质也是一样的道理。对于这种情况建议用湿法上样，如果还不能解决，那就换柱层析体系，用溶解度好的二氯甲烷和某溶剂的体系。

2过反相柱的小技巧

 

情景一反相柱可以湿法上样么？答案是可以的。反相柱体系：乙腈-水，甲醇-水等。我比较建议用乙腈-水体系，因为它和lcms体系更贴合。如果我们手里有反向硅胶，完全可以用干法上样，操作和正相拌样一样。简单介绍一下过反相柱的经验。一：新买的反相柱怎么开柱？开柱好不好直接影响柱子的分离度和使用寿命。法，柱子先用5%的乙腈水溶液润洗一下，再用5%到95%(乙腈含量)空走一次，然后再用5%的乙腈体系平衡一下，向柱子中打入些许甲苯，用5%-95%(乙腈含量)走一次，如果峰形很漂亮，说明开柱成功，可以正常使用(一般都成功)，接下来按着常规操作就可以了。情景二：柱子黑了，堵了，怎么办？几千块钱买的柱子没用几次，很黑，流速又慢，有钱的公司可能直接垃圾桶了。不一定的拯救方法：反向冲柱，可以水相加酸，可以用大极性溶剂，如：甲醇，DMF等，拯救回来的柱子分离度没问题，但是一定要注意保养。反向上样溶剂一定要水溶性的，如甲醇、乙醇、DMF、DMSO等；一定要过滤。滤头不值钱。DMSO可能不好过滤或者柱压过高，建议其它溶剂，三：反相柱上样溶剂量，肯定是越少越好，推荐溶解度好的DMF或DMSO，和上面讲的没矛盾。原理参照正相柱原理，四：出产物比例怎么换算？假如：3分钟的lcms体系(5%-95%)产物正好在乙腈50%出峰了。可以参照(95%-5%)x50%的比例，也就是产物在乙腈45%的时候出峰了，我们过柱子的时候可以减少5%到10%的乙腈浓度。毕竟反相柱和lcms是有区别的。

情景二：过完反相柱一般要后处理了。无外乎三种操作：1：直接浓缩干，底物要稳定；2：萃取，直接用溶剂萃取提取；3：冻干，一定要先把乙腈旋一下，如果底物不稳定就算了。冻干技巧，如果不需要快，一般操作就可以。如果想快，冰层越薄越好，可以用吹风机稍微吹一下，温度控制在40度以内，手摸着温温就最大极限了。冻干的表现：1摸瓶壁不再感觉到凉；2晃动瓶子，内部小颗粒不再释放气体；以上这些并不绝对。