固相合成中怎么监测缩合完全?Kaiser Test?还有更方便的方法

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我们先来了解一下什么是Kaiser Test,其原理是固相上的氨基与茚三酮显色反应,该分析方法相当于检测出末端氨基。茚三酮与氨基反应产生一种Ruhemann’s purple的色素。测试过程中加入苯酚可以调节pH值,KCN的作用是作为还原剂,是为了防止中间体被空气氧化。

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Kaiser Test试剂可以直接购买成品,也可以根据个人需要从廉价的试剂中自制。试液1茚三酮:500 mg,乙醇:10 mL)试液2苯酚:80克,乙醇:20 mL试液31mM KCN水溶液:2 mL,吡啶:100 mL)。操作步骤如下:

  1. 将少量固相合成树脂加入微管中,用MeOH清洗3次(去除体系里的DMF)。

  2. 向微管中加入试液1~3各滴1滴,100℃下加热1分钟。

  3.  如果微管内的溶液呈深蓝色到紫色,则表示存在未被反应掉的末端氨基。无色~黄色的情况,表示缩合反应已经完成。

本期小编给大家介绍的新方法可以称为NHPI试验法,这是一种新的检测方案,可以可逆地对树脂进行染色。NHPI试验可以检测出含有任何级数氨基的氨基酸,且氨基酸种类不受限制。而且不需要担心用到Kaiser test时的剧毒物氰化钾(KCN),并且用于做试验的树脂可以回收利用,由此不会影响总收率。该方法相比Kaiser test方法而言改善了许多。

试液:N-羟基邻苯二甲酰亚胺(NHPI)的饱和DMF溶液(~2.7 M);颜色变化不明显的情况下,使用N,N’-二羟基焦美林胺(NDHPI)代替NHPI可以得到改善。操作步骤如下:

  1. 少量固相合成树脂加入微管中,用MeOH清洗3次(去除体系里的碱)。

  2. 将试液与树脂混合,重复清洗3次。

  3. 如果清洗3次后的树脂呈现红色至褐色则表示存在未反应的末端氨基,如果树脂呈现出无色至黄色,表示缩合反应已经全部进行完毕。

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NHPI试验法,NDHPI试验法Kaiser Test相比具有明显优点,无毒,颜色变化也很明显,可以可逆地对树脂进行染色,NHPI试验可以检测出含有任何级数氨基的氨基酸,且氨基酸种类不受限制。


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